为什么你的PCR实验结果总有TA自己的想法?

相信做过 PCR 实验的伙伴们,一定有过这样的感受:好不容易出一次满意结果,迟迟不能复现,「坑」多,且让人防不胜防!崩溃瞬间……

通常大家可能会想到PCR塑料耗材微量的污染,或者是抑制剂的引入造成的实验干扰,而耗材的选择往往是容易被忽略的问题。

那么,PCR 耗材类型众多,像八联管、低容管、无裙边、半裙边、升孔缘等,如何选择合适的才能让实验更顺利呢?

PCR实验分为普通PCR法和荧光定量PCR法。普通PCR法一般是终点PCR跑胶法测定,所以所用耗材的导热性和密封性和实验结果有着密不可分的关系;而荧光定量PCR是实时检测荧光信号,除了导热性和密封性外,对透光性和避光性也有所要求。

PCR管的体积规格大多数都可以满足PCR反应要求。但是在满足实验要求的基础上,优先推荐选用低容管。因为低容反应管/板有着较小的上方空间,可提高热传导率并降低蒸发。而且在加样时,需要避免加样过量或过少。过量会导致热传导率下降,溢出及交叉污染,而加样过少可能会造成样品蒸发损失。常见反应管的规格及体积:

凸盖:与PCR仪盖接触,减少压力引起的管变形等;但会影响荧光信号传递,无法应用于qPCR实验。

PCR 管常见的有白管和透明管。在传统PCR实验中,两者没有区别。但是,在相同的荧光定量/qPCR实验中,对于顶端信号读取的qPCR仪器(在管的上方采集荧光信号)来说,白管的灵敏度和一致性相对更高。

无裙边板:可适用于大多数的PCR仪或qPCR仪,但不适用于自动化、应用。移液过程中稳定性不高,需要配合板托使用。

半裙边板:可适配标签或应用条码,适合自动化应用,且有着较好的移液稳定性。

全裙边板:非常适用于自动化实验应用,也可适配标签及应用条码。机械强度较好,可适用于凸出模块的PCR仪,且移液过程中稳定性高。

对于PCR板孔缘的选择,通常分为平孔缘和加高孔缘两种。平孔缘的反应板,可适用于大多数的PCR仪;升孔缘的反应板,便于封膜,可降低样品间的交叉污染风险。

黏性透明薄膜比较常见,适配于96或384孔板,要有足够好的光透性。可以在封膜时用个小卡片把孔周围的膜压紧,避免漏气等现象。

黏性铝膜可能比较少见,对于光敏样品是最理想的耗材,由于可以穿刺,便于PCR中样品转移。

总之,耗材作为PCR体系构建的重要组成部分,如何选择对于实验以及数据收集的成功也是至关重要,特别是在中高通量的工作流程应用中。了解这些将会有助于您作出正确的选择并获取最佳的结果。

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