生理指标的测定1doc

一叶绿素的测定-***乙醇提取比色法参照张(1986)的方法:1、先配制乙醇:***=1:1的混合溶液(80%:80%)装入棕色瓶中保存。2、-1g剪碎,放入50ml的培养瓶中,再加入20ml的配制好的上述混合液,盖上瓶盖,置于10℃冷库避光存放36h(直到叶片泛白),其间摇晃2-3次,使叶绿素充分溶解在混合液中。3、避光保存36h后,过滤混合溶液,以提取液作为对照,在紫外分光光度计下分别测定652nm、663nm和645nm处的吸光值。4、计算公式叶绿素a的含量=(*OD663-*OD645)/50+(*OD663-*OD645)/50叶绿素b的含量=(*OD663-*OD645)/50总叶绿素的含量=(*OD645+*OD663)*V/1000*W或总叶绿素的含量=(A652/)*V/1000*W(叶绿素a和叶绿素b在652nm下有相同的吸光系数,)其中V为提取液体积,W为叶片重量,叶绿素含量单位为mg/g(FW).二、维生素C含量的测定李合生,2000年,比色法:常规测定抗坏血酸的方法是采用2,6—二***酚靛酚滴定法,但因某些叶片中花青素量较高,当用酸提取时呈红色,因而无法滴定。本实验采用二甲苯萃取比色法,测不受花青素的干扰。1、原理:向一定量提取液中加入过量的2,6—二***酚靛酚染料溶液与维生素C作用后,多余染料用二甲苯萃取比色。待测液中抗坏血酸的含量与二甲苯萃取的颜色呈线性负相关,即待测液中抗坏血酸含量越多,未被还愿的染料就越少,二甲苯萃取的颜色也就越浅。由于水溶性的花青素不溶于二甲苯,因而不影响测定结果。2、试剂(按照定容100ml计算)(1)1%草酸,;(2)2%草酸,;(3)30%硫酸锌,;(4)15%亚铁***化钾,;(5)染料溶液:称取100mg2,6—二***酚靛酚和82mg碳酸氢钠溶于约60ml热水中,过滤定容至100ml容量瓶中,倒入棕色试剂瓶存放于冰箱内。使用时稀释4倍,。(6)抗坏血酸标准溶液:精确称取100mg分析纯抗坏血酸,溶于1%草酸,定容至100ml,再从中吸取5ml,用1%草酸再稀释至100ml,(标准溶液在使用前临时配置)(7)二甲苯,分析纯(本法使用过的二甲苯可用20%NaOH中和后,蒸馏回收)。3、实验步骤(1)标准曲线个,分别吸取抗坏血酸标准溶液0ml、1ml、2ml、、3ml、4ml,用1%草酸补充至4ml,各管中抗坏血酸含量相应为0mg、、、、、。各管中加入染料溶液2ml,随即加入二甲苯5ml,,静置后二甲苯与水层分离,将上层二甲苯萃取液轻轻倒入比色杯,在500nm波长下测定吸光度。以二甲苯作空白调零,求得标准系列抗坏血酸毫克数与相应的吸光度值的回归方程。(2)样品提取取新鲜蔬菜洗净,擦干,在玻板上用不锈钢刀切碎混匀。称取2g样品放置研钵中,加入3ml2%草酸研钵至匀浆,然后将匀浆倒置100ml容量瓶中,残渣用1%草酸冲洗,洗液一并倒置容量瓶中,加入1ml30%硫酸锌,摇动容量瓶,再加入1

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