PCR实验结果错误出现误差原因分析

实验结果却总是不尽如意,有可能是PCR塑料耗材微量的污染,或者是抑制剂的引入造成的实验干扰。

你看,PCR耗材类型众多:8连管、低容管、标准管、无裙边、半裙边,全裙边,升孔缘等一系列的PCR及qPCR板。

PCR/qPCR耗材一般都是聚丙烯(PP)材质,因其为生物学惰性材料,表面不易于粘附生物分子,且有着良好的化学耐性,及温度耐受性(可121度高压灭菌,也可以承受热循环过程中的温度变化)。这些材料通常会与试剂或者样品直接接触,因而在生产制备过程中需要选用高质量的材料和良好的加工工艺。

PCR管的体积大多数都可以满足PCR反应要求。但是在满足实验要求的基础上,优先推荐选用低容管哦。因为低容反应管/板有着较小的上方空间,可提高热传导率并降低蒸发。而且在加样时,需要避免加样过量或过少。过量会导致热传导率下降,溢出及交叉污染,而加样过少可能会造成样品蒸发损失。大家可依据具体的实验要求选用更合适的产品。

当样品量较少时,都会优先选用单管或者连管。但是当反应体积需求较大时,单管可达到0.5mL呢。平盖和凸盖各有优点呢,可参考下面的信息。

对于普通的PCR反应选用透明或者彩色的PCR管都是可以的,而彩色透明的PCR管更有助于进行样品分类管理哦。

但qPCR更推荐选用优质的白色PCR耗材。由于qPCR需要实时定量检测荧光信号强度,更需要灵敏、精确的荧光信号传递。与传统的透明PCR产品相比,白色PCR产品可最大程度地反射荧光信号,减少孔间信号交叉污染,可优化实时荧光定量PCR的结果。

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